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PCR實驗室屬于三級生物安全實驗室，其產(chǎn)生的污染源主要有哪些?你了解多少，一起來看看吧。
PCR實驗室常見污染物有以下五種:(1)臨床樣本中含有大量待測微生物；(2)通過科學(xué)研究獲得質(zhì)?？寺?；(3)以前分析研究的特定微生物；(4)實驗環(huán)境中含有大量特殊微生物；(5)前期擴(kuò)增產(chǎn)品的殘留污染。
在 PCR實驗室，這也是最容易產(chǎn)生假陽性的污染物。通常，一個典型的 PCR反應(yīng)可以生成10^9個重復(fù)的序列，這樣一個 PCR反應(yīng)就可以產(chǎn)生10^9個重復(fù)的序列，在氣溶膠中，即使是最小的氣溶膠，也可以得到10^6的擴(kuò)增產(chǎn)物。如果不加以控制，氣溶膠化反應(yīng)物在短期內(nèi)會污染實驗室試劑，
儀表與通風(fēng)系統(tǒng)會造成嚴(yán)重的實驗室污染，并產(chǎn)生大量假陽性結(jié)果。RNA擴(kuò)增技術(shù)，如 NASBA (NASBA)，轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增。
不容易產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物(TMA)、 Qbeta復(fù)制酶等，其擴(kuò)增產(chǎn)物為 RNA，在環(huán)境中快速降解。
2.污染預(yù)防措施
(1)嚴(yán)格劃分實驗室，嚴(yán)格遵守
試驗室分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品預(yù)制區(qū)、 PCR擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)等，并配備相應(yīng)的儀器設(shè)備、工作服、手套、取樣裝置和通風(fēng)系統(tǒng)。內(nèi)部區(qū)域
必須直接在各自地區(qū)組裝或包裝使用試劑和廢物。操作者必須小心防止從污染區(qū)，包括頭發(fā)、眼睛和衣服等被帶入清潔區(qū)域。
(2）化學(xué)清理
試驗臺面上可用10%次氯酸鈉(漂白劑)清洗，再用70%乙醇或清水洗去次氯酸鈉。次氯酸鈉可以氧化損傷核酸，因此可以停留在試驗臺表面
分散的產(chǎn)物被摧毀。結(jié)果表明，次氯酸鈉對提取的 DNA和 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物均無法區(qū)分，而用次氯酸鈉處理的樣品無法進(jìn)行核酸擴(kuò)增檢測。實際上，某些項目的實際比率
如果需要進(jìn)入反應(yīng)管的圓盤需要從污染區(qū)轉(zhuǎn)到清潔區(qū)，需要用2-10%次氯酸鈉溶液浸泡一夜，然后充分沖洗。
(3)擴(kuò)展產(chǎn)品改性
臨床 PCR檢測通常包括3~4個步驟：制備核酸提取和擴(kuò)增檢測試劑。樣品處理是一種提取目標(biāo)核酸、 PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物擴(kuò)增等技術(shù)，是一種新的檢測方法。PCR方法同時進(jìn)行 PCR擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物分析。
對以前的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行適當(dāng)?shù)男揎?，新的擴(kuò)增檢測應(yīng)該能被排除，但是為了保證擴(kuò)增檢測不會影響靶核酸，我們必須遵循兩個基本原則：
產(chǎn)物經(jīng)修飾后，可與擴(kuò)增反應(yīng)管進(jìn)行修飾，并可與擴(kuò)增反應(yīng)管相區(qū)別，但不影響擴(kuò)增產(chǎn)物序列。
前處理：紫外光照射，酶處理。
修復(fù)：補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、鹽酸羥胺、引物水解等。
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